Tinciones especiales: ¿cuál, cómo y por qué? Parte II: Tejido conjuntivo

El tejido conjuntivo ayuda al cuerpo proporcionando una matriz que conecta y une las células y los órganos. Hay tres tipos de tejido conectivo en el cuerpo.

El colágeno es una proteína fuerte y es un componente principal de los ligamentos y tendones. También es responsable de la elasticidad de la piel y es el tipo más visible que se puede visualizar con una tinción H&E.

Las fibras elásticas se encuentran en la piel y las paredes de los vasos sanguíneos. Están compuestas de elastina, una proteína que es flexible y permite que muchos tejidos del cuerpo recuperen su forma después de estirarse o contraerse, y no se visualizan mediante una H&E.

Las fibras reticulares están compuestas de colágeno y forman una delicada estructura alrededor de las fibras nerviosas, los adipocitos, los ganglios linfáticos y las fibras musculares lisas y esqueléticas. Tampoco se visualizan mediante una H&E.

Las tinciones utilizadas con más frecuencia para mostrar el tejido conjuntivo

Se utilizan tres tintes para teñir selectivamente, incluidos músculos (rojo), fibras de colágeno (azul), eritrocitos (rojo) y núcleos (negro).

Los tintes se utilizan para teñir biopsias hepáticas con el fin de determinar el grado de fibrosis como en la cirrosis, así como biopsias renales para acentuar la membrana basal y evidenciar depósitos inmunes. Los tintes también se utilizan para diferenciar entre músculo liso y colágeno en tumores y verificar el aumento de colágeno.

Es esencial utilizar una buena solución de Bouin con tiempos de incubación adecuados a la temperatura utilizada. Complete la diferenciación con ácido fosfomolibdico-fosfotúngstico del colágeno hasta eliminar todo el rojo. Si el rojo muscular es pálido, compruebe la viabilidad del escarlata de Bouin y/o Biebrich. Si el colágeno es demasiado pálido, reduzca el tiempo de incubación en GLAA al 1 %. Núcleos: negro

Una solución lo tiñe todo: músculo, fibras de colágeno, fibrina y eritrocitos. Hay dos formulaciones disponibles: azul, para aquellos que prefieren el azul de colágeno como en Masson, y el verde, para aquellos que prefieren el verde de colágeno, y todos los demás resultados son similares a los de Masson.

Los tiempos de incubación pueden variar según las directrices del fabricante.

La tinción de Verhoeff-Van Gieson de fibras elásticas se utiliza para identificar la atrofia del tejido elástico como en el enfisema, la evidencia de enfermedades vasculares (arteriosclerosis) y la invasión de tumores en los vasos.

Los tiempos de incubación pueden variar según las directrices del fabricante.

La solución de Verhoeff debe ser fresca en cada uso debido a la rápida oxidación. No diferencie demasiado en el cloruro férrico, ya que las moléculas del colorante se ven atraídas a este igual que a las moléculas de tejido a las que están unidas y se desunirán del tejido fácilmente y tendrá que comenzar de nuevo.  Incube durante unos segundos y luego enjuague rápidamente y mire en el microscopio para buscar las fibras de tejido elásticas. Cuando sean negras y se diferencien fácilmente del colágeno y otros tipos de tejido, detenga el proceso.

Asimismo, no incube demasiado tiempo en van Gieson ya que el ácido pícrico en solución continuará diferenciando la hematoxilina unida.

Las fibras de reticulina sustentan al cuerpo y son comunes en el hígado, el bazo y los riñones. Los patrones característicos de la reticulina pueden ayudar a diagnosticar cirrosis del hígado, fibrosis temprana en la médula ósea, tumores como hemangiosarcomas (tumores de las células que recubren los vasos sanguíneos), tumores fibroblásticos y rabdomiosarcomas (tumores de los músculos adheridos al hueso). También pueden ayudar a diagnosticar tumores epiteliales frente a no epiteliales.

Las manchas de reticulina utilizan plata y dependen de las propiedades argirófilas de las fibras. Las células argirófilas pueden adsorber plata pero no pueden reducirla. Adsorber hace referencia al proceso basado en la superficie; en cambio, absorber se refiere a la permeación a través del tejido. Las células argirófilas necesitan un reductor / revelador para convertir las sales de plata invisibles en una plata metálica visible.

Solución de problemas de la reticulina de Gomori:

La solución de plata debe prepararse con agua destilada y en recipientes limpios (no es necesario limpiarla con ácido). Vaya con cuidado al preparar la solución de plata. El uso de hidróxido de amonio viejo y sin amoníaco puede hacer que la solución falle. No utilice un exceso de hidróxido amónico para eliminar la solución de hidróxido de plata/sodio. El exceso de hidróxido amónico dará lugar a una tinción débil.

Cómo hacer solución amoniacal de plata:

Cómo mostrar el colágeno, las fibras elásticas, las fibras reticulares, los núcleos y el músculo con un solo procedimiento

Movat Pentachrome es una tinción de tejido super conectivo. Se utiliza para estudiar el tejido cardíaco, los vasos sanguíneos y las enfermedades vasculares y pulmonares. Debido a la excelente diferenciación de colágeno, elástico, fibrina y fibras musculares, el Movat puede revelar cambios sutiles que las tinciones especiales de rutina y normales no muestran.

Los tiempos de incubación y la secuencia de reactivos pueden variar según el fabricante, pero los resultados son similares.

El azul alcián debe utilizarse con pH de 2,5. La eliminación completa del alcohol alcalino es esencial para una buena tinción. La solución de Verhoeff debe renovarse cada vez que se utilice, ya que se oxida rápidamente. Tenga cuidado de no diferenciar en exceso las fibras elásticas en el cloruro férrico. Sumerja una o dos veces y luego enjuague en agua destilada y compruebe al microscopio.  Repita según sea necesario. No utilice alcoholes graduados para deshidratar, empiece con alcohol absoluto. No permita que las secciones se sequen durante el procedimiento de tinción.