Introducción a la microtomía: Preparación y corte de tejidos incluido en parafina

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Desde el paciente hasta el patólogo, la preparación de muestras de tejidos para su examen histológico requiere cuidado, habilidad y un procedimiento delicado. Esta guía proporciona asesoramiento práctico sobre las mejores técnicas, así como formas sencillas de evitar errores comunes.

En esta guía se ofrecen consejos para una mejor microtomía, flotación y secado de secciones. Esperamos que cada paso proporcione un valioso recordatorio de buenas prácticas histológicas y ayude a solucionar problemas cuando se produzcan resultados inaceptables.

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Siempre se utilizan cuchillas afiladas de alta calidad para cortar.

Se utilizan las cuchillas durante el mayor tiempo posible; algunas “estrías lineales” se consideran aceptables.

Siempre se optimiza el ángulo de inclinación de la cuchilla para cada tipo de microtomo y de cuchilla.

El ángulo de inclinación de la cuchilla no se ajusta cuando cambian las condiciones (diferente microtomo, nuevo tipo de cuchilla, diferente parafina, etc.).

Los bloques se recortan con cuidado para exponer el tejido. Las últimas secciones siempre se cortan con el que será el espesor final para pulir la cara del bloque.

Los bloques se recortan bruscamente para ahorrar tiempo. La superficie no se pule antes de tomar las secciones finales. Esto a menudo produce un aspecto de “apolillado” en la sección final que está llena de pequeños orificios irregulares.

Los bloques se enfrían en una superficie húmeda y fría y siempre están fríos cuando se cortan (la superficie de hielo derritiéndose es excelente).

Los bloques se congelan antes de cortarlos. Esto a veces hace que los bloques se agrieten.

Los bloques siempre están fríos cuando se cortan.

A veces hay un retraso antes de que las secciones finales se corten de un bloque. El bloque puede estar caliente y esto puede provocar una compresión excesiva de las secciones.

Las secciones finales de cada bloque se cortan con cuidado con un giro uniforme y lento.

Las secciones se cortan lo más rápido posible con un giro rápido, creyendo que “se superará cualquier compresión de sección en el baño de flotación”.

El agua del baño de flotación se sustituye periódicamente.

El agua del baño de flotación se rellena periódicamente, pero se sustituye solo ocasionalmente. Cualquier contaminante que haya en el baño puede acabar en la preparación debajo de la sección (hongos, moho, etc.)

Siempre se comprueba la limpieza de las preparaciones antes de utilizarlas. La manipulación de las preparaciones es mínima para evitar la contaminación con células escamosas antes de la flotación.

No se comprueba la limpieza de las preparaciones: “Siempre que las secciones permanezcan en la preparación durante la tinción, consideramos que son satisfactorias”. El polvo, los organismos y otros contaminantes pueden estropear una preparación que de otro modo sería buena.

Siempre se quita la espuma de la superficie del agua entre las muestras para evitar la contaminación de una sección con células de otra.

No se quita la espuma de la superficie del agua entre cada bloque. Esto puede provocar contaminación de muestra a muestra, lo que puede causar confusión e incluso un diagnóstico inexacto.

Se debe tener cuidado de no cepillar el pelo o las manos mientras hay secciones flotando (las escamas pueden contaminar las secciones).

“Algunos de nuestros empleados producen preparaciones que contienen muchas escamas. Parecen no saber que esto se puede evitar”.

Las secciones de más de un bloque (caso) nunca se ponen a flotar simultáneamente en el baño de agua.

A veces, las secciones de dos o más bloques (casos) se dejan flotando simultáneamente. Se trata de una práctica peligrosa que puede dar lugar a una identificación inexacta de las muestras. Existe un riesgo concreto cuando las secciones proceden del mismo tipo de muestra.

La temperatura del baño de flotación se comprueba cuidadosamente. Una temperatura de 4-5 °C por debajo del punto de fusión de la parafina es óptima. Las secciones deben aplanarse rápidamente, pero la parafina no debe fundirse.

Si las secciones se dejan en el baño de flotación durante más de 15 segundos, la parafina se funde. Aunque parezca que esto hace que el proceso sea más rápido, puede provocar rápidamente una expansión excesiva y daño celular y en el tejido.

Las secciones se aplanan rápidamente en el baño de flotación.

Las secciones nunca se aplanan bastante en el baño de flotación. El baño puede estar demasiado frío y las secciones pueden permanecer arrugadas cuando se recogen en la preparación.

Las secciones se dejan en el baño de flotación durante el tiempo suficiente para que se aplanen y, a continuación, se recogen rápidamente en una preparación.

Por comodidad, algunas secciones se dejan durante largos períodos en el baño de flotación. Esto puede provocar una expansión excesiva y daño en el tejido (especialmente en muestras delicadas como el tejido linfoide).

Al eliminar mecánicamente las arrugas con un cepillo o unas pinzas, se tiene mucho cuidado para evitar dañar las secciones flotantes.

Las arrugas se eliminan enérgicamente de las secciones flotantes con un cepillo o unas pinzas. Este procedimiento puede provocar fácilmente daños macroscópicos y microscópicos.

La primera o dos primeras secciones de una cinta nunca se recogen en las preparaciones.

Se seleccionan la primera y segunda secciones de una cinta para el montaje porque tienen mejor aspecto que las secciones posteriores. Tienen mejor aspecto porque son siempre más gruesas debido a la expansión del bloque frío durante el primer par de pasadas a través de la cuchilla.

Se debe tener cuidado para evitar la formación de burbujas de aire en el baño de flotación. Las burbujas visibles se quitan antes de que las secciones se depositen en el agua.

Se ignoran las pequeñas burbujas de aire en el baño de flotación. Las burbujas que quedan atrapadas debajo de la sección aparentemente desaparecen a medida que la sección se seca. Aunque las burbujas aparentemente pueden desaparecer, las zonas de la sección por encima de la burbuja a menudo se distorsionan y es probable que dejen de flotar durante la tinción.

Se considera el uso de preparaciones “adhesivas” (cargadas) o adhesivos de sección, como AAS, y se utiliza de forma adecuada.

A veces, las secciones dejan de flotar durante la tinción (especialmente durante la recuperación de antígenos para IHC o cuando los métodos requieren el uso de calor). En estas circunstancias, se requieren preparaciones cargadas o adhesivos de sección.

Las secciones se drenan brevemente antes de colocarlas en el secador de preparaciones o en una placa calefactora.

Las secciones no se drenan correctamente antes de secarse horizontalmente. Las secciones se mueven sobre la preparación y a veces no se secan en plano.

La temperatura del secador de preparaciones se supervisa minuciosamente.

A veces, el secador de preparaciones está muy caliente. El calor excesivo puede producir puntos calientes en las secciones y provocar una   tinción irregular.

Se supervisa el tiempo mínimo y máximo de secado de la preparación.

Los tiempos de secado de las preparaciones varían considerablemente. El secado prolongado a temperaturas más altas puede ser perjudicial para las secciones.

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